几丁质酶（几丁质酶基因为什么能抗真菌）

本篇文章给大家谈谈几丁质酶，丁质以及几丁质酶基因为什么能抗真菌对应的酶丁知识点，希望对各位有所帮助，质酶真菌不要忘了收藏本站喔。基因

几丁质酶单体是什么?是N乙酰氨基葡糖苷酶吗? RT

几丁质酶是蛋白质,（酶有两种成分,绝大多数是蛋白质,极少数是RNA）蛋白质的单体我想大家都知道是：氨基酸.

而是N乙酰氨基葡糖胺是几丁质被几丁质酶水解过后的生成物.N乙酰氨基葡糖苷酶是进一步催化分解N乙酰氨基葡糖胺的酶.

提取几丁质酶为什么用嫩叶

（1）由于嫩叶中几丁质酶转录的mRNA较多，因此在进行基因工程操作时，酶丁若要从植物体中提取几丁质酶的质酶真菌mRNA，常选用嫩叶而不选用老叶作为实验材料．提取RNA时，基因提取液中需添加RNA酶抑制剂，丁质其目的酶丁是防止提取的mRNA被RNA酶分解．

（2）以mRNA为材料可以获得cDNA，原因是质酶真菌mRNA可根据碱基互补配对原则逆转录为cDNA．

（3）若要使目的基因在受体细胞中表达，需要通过质粒载体而不能直接将目的基因基因导入受体细胞，原因是丁质：质粒载体中有启动子、终止子，酶丁便于目的质酶真菌基因的表达；质粒中有标记基因便于筛选；质粒中含有复制原点等．

（4）DNA连接酶催化形成的化学键是磷酸二酯键．

（5）基因表达包括转录和翻译两个步骤，若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，其可能的原因是几丁质酶基因没有转录或转录的mRNA没有翻译．

故答案为：

（1）嫩叶中几丁质酶转录的mRNA较多 防止提取的mRNA被RNA酶分解

（2）mRNA根据碱基互补配对原则逆转录为cDNA

（3）质粒载体中有启动子、终止子，便于目的基因的表达；质粒中有标记基因便于筛选；质粒中含有复制原点等

（4）磷酸二酯键

（5）几丁质酶基因没有转录或转录的mRNA没有翻译

几丁质酶杀菌的原因

几丁质酶的本质是蛋白质，其作用主要是降解几丁质。根据查询相关公开信息显示，而几丁质是构成植物病原真菌和昆虫外骨骼的组分，且高等动植物和人类体内不含几丁质，几丁质酶用于植物病虫害防治的优势是无污染。

几丁质酶可以分解甲壳类动物和昆虫的外骨骼吗?

可以。几丁质酶（chitinase）是以几丁质为底物并将其水解为N-乙酚寡糖和葡萄糖的酶系。其可以分解甲壳类动物和昆虫的外骨骼，因为其具有其降解真菌细胞壁和昆虫外骨骼中甲壳素的独特能力就是酶系，酶系是在细胞内的某一代谢过程中，由几个酶形成的反应链体系。其存在形式可以是可溶性的、寡聚化复合物的和在细胞结构上有定位关系的三种类型。

[文献分享]稻瘟病中的几丁质酶参与水稻免疫

这次分享的是一篇中规中矩的文章，并没有太多出彩的地方，但是逻辑性较好，对于试验方法的应用具有较强的借鉴意义。福建农林的老师于2019年发表在 plant physiology 上的paper A Magnaporthe Chitinase Interacts with a Rice

Jacalin-Related Lectin to Promote Host Colonization

水稻稻瘟病的基因组编码15个糖苷水解酶，18个家族的几丁质水解酶。本文主要讲了稻瘟病中的chitinase MoChi1和水稻中的膜蛋白 OsMBL1互作，从而在植物PTI过程中发挥作用。在稻瘟病中敲除MoChi1还会导致菌丝减少和毒性减少，因为导致了植物防卫相关基因的表达。OsMBL1正调抗病性，MoChi1抑制了几丁质介导的活性氧爆发，并且与OsMBL1竞争性结合几丁质。

1.MoChi1 Is a Highly Conserved Chitinase from M. oryzae

MoChi1包含N端信号肽和GH18(Glycoside hydrolase)结构域，并且与其他致病真菌的糖苷水解酶同源性很高，暗示其可能有几丁质酶的活性。

2.MoChi1 Is an Extracellular Chitinase Released by

M. oryzae

构建MoChi1连GFP的载体，做融合蛋白，转入稻瘟病菌中，从上清中收集到了蛋白，说明MoChi1是个胞外蛋白。接下来使用yeast trap secretion assay 证明其分泌特征，与蔗糖酶(SUC2)构建融合蛋白，一个是全长(FL-MoChi1)，一个去掉去掉信号肽但在蛋白前段加上‘ATG’(NS-MoChi1)。如果蔗糖酶分泌的话，就会把蔗糖水解成葡萄糖和果糖。结果显示，转FL-MoChi1的酵母在蔗糖培养基上生长且培养基变红，而NS-MoChi1在蔗糖培养基中不生长，说明MoChi1中信号肽对其分泌很重要。

使用几丁质结合和几丁质分解活性的试验来检测MoChi1是否有几丁质酶活性。在几丁质结合试验中，将纯化的SSB-MoChi1-6*His蛋白与不溶性的细胞壁多糖孵育，结果显示，融合蛋白特异性地与不溶性的几丁质beads、crab shell chitin、chitosan、稻瘟病的细胞壁和几丁质共沉淀，而不与纤维素共沉淀。这些结果揭示MoChi1特异性结合几丁质。

MUC3是几丁质酶的一种商业化的荧光底物，使用它来查看几丁质酶的活性。

综上，这些结果显示，MoChi1是一种由稻瘟病分泌的几丁质酶，能将MUC3降解成短链。

3.MoChi1 Is Involved in M. oryzae Aerial Growth

首先检查MoChi1在稻瘟病不同时期的亚细胞定位，发现大部分MoChi1在营养菌丝隔膜上积累。以菌落直径作为衡量标准时，在稻瘟病中敲除MoChi1并不会造成营养生长的缺陷。

4.MoChi1 Is Required for the Aggressiveness of M. oryzae

为了确定MoChi1是否促进了稻瘟病的致病性，将Ku80(WT)、ΔMochi1(KO), and ΔMochi1/MoChi1(complement)接种于感病植株(CO39)，结果发现ΔMochi1菌的数量和大小比WT和互补菌中更少。通过对稻瘟病转座因子基因Pot2的定量PCR检测，发现ΔMochi1的生物量比野生型Ku80和互补菌株ΔMochi1/MoChi1减少了4- 5倍的生物量。

5.MoChi1 Interacts with the Rice JRL OsMBL1

酵母晒库筛到OsMBL1，通过Y2H，Co-IP，BiFC(揭示其互作可能发生在膜上)，PULL DOWN验证了其互作。缺乏N端19个氨基酸的OsMBL1仍能与MoChi1互作；而缺乏C端66个氨基酸的OsMBL1不能与MoChi1互作，N端和C端同时切掉后，也没有互作，这就揭示了OsMBL1的C端对于其与MoChi1的互作很重要。

6.OsMBL1 Is Responsive to PAMPs and M. oryzae Infection

chitin处理2h后，OsMBL1的表达量上升了大约六倍；flg22处理后，在30min到2h之间，表达量上升2-5倍不等。而接种稻瘟病后，在24h后大约上升了15倍。

7.Overexpression of OsMBL1 Enhances Rice Resistance to

M. oryzae

OsMBL1过表达植株中展示出十倍减少的真菌定植量。为了寻找OsMBL1在PTI中的作用，我们衡量了OsMBL1中ROS的爆发，然后发现在OsMBL1过表达植株中几丁质诱导的ROS的积累出现更早且强。将OsMBL1 RNAi后，在日本晴背景中，病斑长度更大。

8.MoChi1 Competes with OsMBL1 for Chitin Binding and

Suppresses Chitin-Induced ROS in Rice Cells

植物病原菌释放的低聚糖可以被宿主PRR识别，从而启动防御反应。预测糖基磷脂酰肌醇位点锚定在OsMBL1C端，提示该蛋白可能与质膜相联系。烟草瞬时表达和稳转材料都揭示OsMBL1在质膜上。

为了查明OsMBL1是否结合几丁质，纯化的GST-OsMBL1与不同的多糖进行孵育。结果显示，OsMBL1与不溶性的几丁质beads、crab shell chitin、chitosan、来自稻瘟病的细胞壁成分、来自稻瘟病的chitin和纤维素都有共沉淀，这就揭示了OsMBL1能够结合稻瘟病的细胞壁、几丁质和纤维素。

稻瘟病中的LysM效应子 Slp1竞争性抑制几丁质受体CEBiP，并且抑制了几丁质触发的免疫反应。往GST-OsMBL1溶液中滴定SSB-MoChi1-6XHis，然后再加入chitin beads。我们观察到添加的MoChi1的量与用几丁质珠拉下的OsMBL1的量呈负相关(随着SSB-MoChi1-6XHis浓度的增加，PULL DOWN下来的OsMBL1量减少，而MoChi1的量变多；反过来也发现随着OsMBL1的量增加，MoChi1的量也减少)。这些结果说明，MoChi1与OsMBL1竞争性的结合chitin。体内试验的话，就用ROS burst作为marker，用纯化的蛋白来孵育。

最后是model图。

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